我說的天地的部落格

腺苷酸能量電荷（AEC）
將培養物連續稀釋並沉積在0.45μm上
膜過濾器通過抽吸，然後暴露於各種
治療方式。預熱的沸騰緩衝溶液
（50mM Tricine，10mM MgSO4和2mM EDTA at
將pH 7.8）加入到樣品中，混合物為
加熱3分鐘。將煮沸的提取物在冰上冷卻
至少10分鐘並保持在室溫下。
為了測量ATP，將提取物加入到反應緩衝液中
（75mM Tricine，pH7.5; 5mM MgCl 2和0.0125mM
氯化鉀）。為了測量ADP + ATP，添加提取物
加入0.5mM磷酸烯醇丙酮酸鹽的相同反應緩衝液
（Sigma）和0.4μg/μl的丙酮酸激酶
（Sigma）中。通過測量AMP + ADP + ATP
進一步添加0.5μg/μl的腺苷酸（myo）激酶
（Sigma）到緩衝區。 ATP和ADP + ATP混合物
在30℃下孵育30分鐘，和AMP
+ ADP + ATP混合物在37℃溫育90分鐘
30°C，全部放入沸水浴中
3分鐘停止反應，在冰上冷卻並保持在
室內溫度。然後用熒光素/確定ATP /
熒光素酶使用熒光素酶檢測試劑（Promega）
和SpectraMax L發光計（Molecular Devices）。
按照Atkinson [（ATP）+所述計算AEC
0.5（ADP）] / [（ATP）+（ADP）+（AMP）]。[1]

通過迅速混合製備脫蛋白細胞提取物
0.75毫升相應的細菌培養物作為lurrycom-
由0.75ml苯酚[用10mM Tris和1mM平衡]構成
EDTA（pH = 8），預熱至80℃]和0.5g玻璃珠
（106毫米直徑; Sigma-AldrichCo。），然後是有力的
渦旋30秒。在室溫下靜置30分鐘後，
將樣品再次渦旋30秒。兩個階段明顯不同
通過在4℃1℃下以12500g離心10分鐘分離
隨後是Eppendorf微量離心機和水相
用1體積的CHCl3處理兩次以提取任何殘留的苯酚。
保留這些提取物並立即用於腺嘌呤
核苷酸測定。腺苷酸能量電荷（AEC）是水解 - 
高能磷酸鹽相對飽和度的測定
在細胞的腺苷酸池中可獲得的酸酐鍵（Chapman
等，1971年; Lundinetal。，1986），並且可以表達
式AEC =（[ATP] +0.5 [ADP]）/（[ATP] + [ADP] + [AMP]）。
該測定的第一部分包括在存在的情況下ATP與ATP和PPi與ATP硫酸化酶的不可逆轉化
鉬酸鹽（Schultz等，1993）。有動作混合物組成
50mMTris？ HCl（pH = 8.0），5mM MgCl 2,10mM Na 2 MoO 4，
2.5 mM GMP，適量的脫蛋白和中和样品（佔總體積的25％），和
0.5單位的腺苷 -  50  - 三磷酸硫酸化酶（來自S. cere-
visiae，Sigma-AldrichCo。）。將反應物在30℃溫育1小時
20分鐘後，腺苷 -  50  - 三磷酸硫酸化酶
在70度下滅活10分鐘。殘留的ATP量化
所得提取物的等分試樣並一致地考慮
r <原始數量的2％。在測定的第二部分，
通過混合a將樣品中存在的ADP轉化為ATP
100毫升等份的ATP硫酸化酶處理的樣品用100毫升
是含有45mM Tris的作用混合物嗎？ HCl（pH = 8.0），
4.5mM MgCl 2,36mM KCl，0.5mM磷酸烯醇丙酮酸鹽和
1.5單位丙酮酸激酶（來自兔肌肉，Sigma-Aldrich
（）（Nilsson等，1996）。將反應物在25℃溫育
30分鐘後，加入800毫升milli-Q H2O。 ADP-
在這些提取物中測定衍生的ATP。 ADP計算為
孵育後測量的ATP之間的差異
用丙酮酸激酶和隨後測量的殘留ATP測定
用ATP sulfurylasealone處理。對於AMP測定，
1.25單位的腺苷酸肌醇激酶（來自兔肌肉，Sigma-
Aldrich Co.）也被添加到單獨的測定中。除了
用於運行校準曲線的AMP，ADP和ATP標準，
一些實驗樣品加入了已知的
每種核苷酸的量，在所有情況下結果均為
通過存在來校正ATP信號的猝滅
丙酮酸激酶和/或腺苷酸肌醇激酶。[2]

文獻:

Engineeringananaerobicmetabolicregimein Pseudomonas putida KT2440 for theanoxicbiodegradationof1,3-dichloroprop-1-ene

The bactericidal effect of an ionizer under low concentration of ozone